“Caracterización morfológica y molecular de agentes patogénicos en plantaciones de gmelina arbórea roxb (melina)” en tres zonas representativas del Ecuador
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2020
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Quevedo: UTEQ
Abstract
La melina (Gmelina arborea (Roxb) es una especie forestal que presenta características de crecimiento rápido y produce madera de alta calidad. Actualmente se reporta en el país una mortalidad creciente en este cultivo debido al cáncer de tronco y cuyo agente causal ha sido hasta ahora desconocido. Con el objetivo de identificar el agente causal se recolectaron muestras de árboles sintomáticos de 2 años de edad procedentes de cuatro zonas productoras de Melina pertenecientes a la empresa “Seragroforest S.A” los cuales se identificaron como Pitzara (CE28), La Palma (CH32A), Silanche (CJ30A) y Vergel (CH22A). Los aislamientos se realizaron en medio de cultivo Papa dextrosa agar sembrando fragmentos tomados desde el avance de la enfermedad de aproximadamente 2 cm de manera equidistante. Se obtuvieron cultivos puros de un hongo, el cual se identificó comparando sus características micro y macroscópicas con claves taxonómicas especializadas. Las características culturales y las estructuras microscópicas coincidieron para los aislamientos de las distintas zonas. Se identificó a Fusarium sp. Encontrándose mayores similitudes con la especie F. solani. Los aislados se sometieron a ensayos de crecimiento radial en medio PDA determinando la existencia de diferencia significativa entre las cepas siendo la perteneciente al sector Silanche (Rodal CJ30A ) la que presentó el mayor velocidad de crecimientoa los 2,4 y 7 ddi e infiriendo así que esta es la cepa de mayor patogenicidad. En el conteo de esporas, la cepa con más alta concentración fue la perteneciente a las Palmas (CH32A) con un promedio de 2,67 X105. Se evaluó el efecto antagónico in vitro de las PGPR Acinetobacter calcoaceticus (PM2-12), Pseudomona protegens (CHA0), Serratia marcescens PM3-8, Pseudomona veronii R4, Enterobacter absuriae PM3-14 y el hongo Trichoderma sp. . Los ensayos resultaron en que las cepas pertenecientes a P. protegens CHA0 y Trichoderma sp. Presentaron los mayores promedios de supresión de crecimiento radial con porcentajes de 81.68 y 70.08% respectivamente. En la variable número de esporas, se encontró que todos los tratamientos mostraron una reducción significativa destacándose los tratamientos conformados por P. protegens CHA0 y Trichoderma sp con porcentajes de inhibición de 85.6 y 80.86% . Determinando su potencial como agentes de biocontrol para pruebas in vivo. ADN de las 4 cepas en estudio se extrajeron mediante el Kit Dneasy kit miniplant se recolectaron en tubos eppendorf y se aplicó la reacción en cadena de la polimerasa del consenso intergenico repetitivo enterobacteriano (ERIC-PCR) para el genotipado molecular fúngico y así determinar variaciones genéticas intraespecificas.
Palabras clave:Gmelina arborea Aislamiento, marchitez vascular, Fusarium sp., crecimiento radial, ensayos antagonistas, PGPR ,Trichoderma sp.
Description
Melina (Gmelina arborea (Roxb) is a forest species that has characteristics of rapid growth and produces high-quality wood. Currently, there is a reported increase in mortality in this country due to trunk cancer and whose causative agent has been until now unknown. In order to identify the causative agent, samples of 2-year-old symptomatic trees were collected from four Melina producing areas belonging to the company “Company Name” which were identified as Pitzara (CE28), La Palma (CH32A ), Silanche (CJ30A) and Vergel (CH22A). The isolates were carried out in Papa dextrose agar culture medium by sowing fragments taken from the disease progression of approximately 2 cm in an equidistant manner. Pure cultures of a fungus were obtained, which was identified by comparing its micro and macroscopic characteristics with specialized taxonomic keys. Cultural characteristics and microscopic structures coincided for the isolation of the different areas. Fusarium sp. Finding greater similarities with the species F. solani. The isolates were subjected to radial growth tests in PDA medium determining the existence of a significant difference between the strains being the one belonging to the Silanche sector (Rodal CJ30A) which presented the highest growth rate at 2.4 and 7 ddi and thus inferring that This is the most pathogenic strain. In the spore count, the strain with the highest concentration was that belonging to Las Palmas (CH32A) with an average of 2.67 X105. The in vitro antagonistic effect of PGPR Acinetobacter calcoaceticus (PM2-12), Pseudomona protens (CHA0), Serratia marcescens PM3-8, Pseudomona veronii R4, Enterobacter absuriae PM3-14 and the fungus Trichoderma sp. . The trials resulted in the strains belonging to P. protens CHA0 and Trichoderma sp. They presented the highest averages of suppression of radial growth with percentages of 81.68 and 70.08% respectively. In the variable number of spores, it was found that all treatments showed a significant reduction, highlighting treatments consisting of P. protens CHA0 and Trichoderma sp with inhibition rates of 85.6 and 80.86%. determining its potential as biocontrol agents for in vivo tests. DNA from the 4 strains under study were extracted using the Dneasy kit and miniplant kit were collected in eppendorf tubes and the polybarase chain reaction of the enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC-PCR) was applied for fungal molecular genotyping and thus determine genetic variations intraspecific.
Keywords: G. arbórea, vascular wilt, Isolates, fungal isolation, radial growth,Fusarium sp. antagonistic tests PGPR ,Trichoderma sp.
Keywords
Aislamiento, Marchitez vascular, Fusarium sp, Crecimiento radial
Citation
Tercero Tercero, Holguer (2020). “Caracterización morfológica y molecular de agentes patogénicos en plantaciones de gmelina arbórea roxb (melina)” en tres zonas representativas del Ecuador. Quevedo. UTEQ. 77 p.