Protocolos de extraccion de ADN en sangre de cerdos criollos en Quevedo.
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Date
2015
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Publisher
Quevedo-Ecuador
Abstract
Se planteó una investigación cuyo objetivo fue realizar un protocolo de extracción de ADN en cerdos criollos nacionales, con un alto grado de pureza y concentración, para la obtención de Marcadores Moleculares que permita conocer su potencialidad en la producción. La extracción de ADN a partir de sangre implica la utilización de metodologías complejas debido a problemas como la degradación, las cantidades limitantes de ADN y la presencia de sustancias inhibidoras que pueden ser co-extraídas con el ADN. En el Laboratorio de Biotecnología de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo se ha dificultado la estandarización de un protocolo útil para extracción y análisis de ADN de alta calidad y cantidad. Con el fin de encontrar un método que proporcione las mejores condiciones de extracción, purificación y amplificación de ADN, se realizó la comparación de dos metodologías de extracción de ADN a partir de sangre periférica, entre ellas el método de Salting out, y el método TENs utilizado actualmente en el laboratorio, permitieron la obtención de ADN de calidad y pureza necesarias para la amplificación mediante PCR a partir de volúmenes de sangre, con un volumen mínimo 100 µL de sangre de partida. Por otro lado se emplearon las metodologías de electroforesis y espectrofotometría para la evaluación de la calidad y cantidad de ADN extraído, logrando determinar el mejor método de extracción de ADN el T5. Como conclusión mediante las dos metodologías empleadas para la cuantificación de ADN, se determinó que el Salting out, el cual se basó en la extracción de ADN con fenol, cloroformo y alcohol isoamílico, fue el mejor método de extracción de ADN, logrando obtener buenos rendimientos y calidad.
Palabras clave: Muestras de sangre; Extracción ADN; salting-out; PCR, TENs.
Description
An investigation whose purpose was to conduct a DNA extraction protocol in national creole pigs with a high degree of purity and concentration, to obtain molecular markers designed to show its potential in production arises. DNA extraction from blood involves the use of complex methodologies due to problems such as degradation, limiting amounts of DNA and the presence of inhibitors that may be co-extracted DNA. In the Laboratory of Biotechnology of the State Technical University Quevedo has hindered the standardization of a useful DNA extraction and analysis of quality and quantity protocol. In order to find a method which provides the best conditions of extraction, purification and DNA amplification methodologies comparing two DNA extraction from peripheral blood, including salting out method was performed, and method TENS are currently used in the laboratory, allowed obtaining DNA quality and purity required for PCR amplification from blood volumes, with a minimum volume of 100 mL starting blood. Furthermore methodologies electrophoresis and spectrophotometry were used to evaluate the quality and quantity of extracted DNA, achieving determine the best method for extracting DNA T5. In conclusion by the two methodologies for DNA quantification, it was determined that the salting out, which was based on the extraction of DNA with phenol, chloroform and isoamyl alcohol was the best method for extracting DNA, obtaining good yields and quality.
Keywords: Blood samples; DNA extraction; salting-out; PCR, TENs.
Keywords
Extraccion de ADN, Cerdos criollos en Quevedo
Citation
Protocolos de extraccion de ADN en sangre de cerdos criollos en Quevedo. UTEQ. 72p