Establecimiento de una metodología para la extracción y purificación de ADN genómico de Gmelina arbórea Roxb.
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Date
2014
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Publisher
Quevedo : UTEQ
Abstract
La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Biología Molecular de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ) ubicada en la Av. Quito km ½ vía a Santo Domingo de los Tsáchilas. Las muestras colectadas fueron hojas y raíces de melina de la finca experimental “La Represa”, ubicada en el Km. 13 vía Quevedo – San Carlos Rcto. Fayta, propiedad de la UTEQ. EL objetivo fue optimizar una metodología de extracción y purificación de ADN genómico de Gmelina arbórea Roxb (melina) para su empleo en futuros análisis genéticos. Para la extracción de ADN de alta calidad se evaluaron cuatro protocolos que fueron: Uyemoto et al. 1998; Doyle & Doyle 1990 y el kit DNeasy Plant Mini. Se empleó un Diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA) con arreglo bifactorial: el primer factor fueron los tres protocolos y el segundo factor fueron hojas y raíces provenientes de árboles adultos, jovenes y plántulas con cuatro repeticiones. Para determinar diferencias entre medias se usó la prueba de Tukey (P<0.05). De los protocolos evaluados para la extracción del ADN, el mejor (en cantidad) fue el kit DNeasy Plant Mini utilizando como fuente de tejido la parte radicular de los arboles jóvenes de melina con 713,42 ngL-1. En cuanto a la calidad el protocolo kit DNeasy Plant Mini muestra un ADN medio con 59,17 por ciento, y proviniendo desde hojas de plántulas donde se obtuvo una media de 73,33 por ciento con una calidad alta de ADN. Los nueve iniciadores empleados para realizar la amplificación del ADN en tejidos de melina; y evaluando dos mezclas; a) solo se obtuvo reacción con los iniciadores OPA13, OPA 07 (2004 y 2008) y OPC8, b) de la unión de dos iniciadores resultó reacción entre OPA 03 con OPA 14 y OPA 07 con OPC 13 y el OPA 07 con el OPA 04.
Description
This research was conducted at the Laboratory of Molecular Biology, State Technical University Quevedo (UTEQ) located at Av. Quito ½ km route to Santo Domingo Tsáchilas. The collected samples were gmelina leaves and roots in the experimental farm "Dam" located at Km 13 via Quevedo. - San Carlos RCTO. Fayta owned UTEQ. The objective was to optimize a method for extracting and purifying genomic DNA Roxb Gmelina arborea (gmelina) for use in future genetic analysis. Uyemoto et al: DNA extraction for high quality four protocols that were evaluated. 1998; Doyle & Doyle 1990 and DNeasy Plant Mini Kit. Design of randomized complete block (RCBD) was employed under two-factor: the first factor was the three protocols and the second factor was leaves and roots from mature trees and young seedlings with four replications. To determine differences between means by Tukey test (P <0.05) was used. Evaluated protocols for DNA extraction, the best (in quantity) was the DNeasy Plant Mini kit using as source the root tissue of young trees with 713.42 melina NGL-1. In terms of quality the DNeasy Plant Mini Kit protocol sample DNA medium with 59.17 percent, and coming from seedling leaves in which an average of 73.33 percent was obtained with a high quality DNA. The nine primers used for DNA amplification gmelina tissue; and evaluating two mixtures; a) only reaction was obtained with OPA13 primers, OPA 07 (2004 and 2008) and OPC8, b) the union of two primers resulted reaction between OPA 03 on OPA 14 and OPA 07 with OPC 13 and OPA 07 with OPA 04.
Keywords
Metodología, Extracción, Purificación, ADN genómico, Gmelina
Citation
Acosta Lucas, Karen Cristina. (2014). Establecimiento de una metodología para la extracción y purificación de ADN genómico de Gmelina arbórea Roxb. Quevedo. UTEQ. 73 p.